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22C: Diagrama de flujo para bacterias desconocidas - Biología


22C: Diagrama de flujo para bacterias desconocidas

Ejemplo de informe de laboratorio desconocido, microbiología

La forma en que las bacterias funcionan y prosperan es importante, especialmente para las personas que ingresan al campo de la atención médica, porque les permite comprender mejor cómo trabajar con las bacterias o combatirlas. El curso de Microbiología General I enseñó a los estudiantes sobre muchos tipos de bacterias. Se practicaron varios procedimientos en el laboratorio de microbiología para ayudar a los estudiantes a comprender mejor cómo las bacterias prosperan, crecen y se regeneran. Estos métodos se utilizaron para determinar qué dos bacterias desconocidas estaban presentes en el tubo de ensayo.


MATERIALES Y MÉTODOS:

El profesor asignó el tubo de ensayo Unknown 109. Además, se proporcionó un tubo alternativo n. ° 4 porque el tubo Unknown 109 no permitía que se mostrara el gram negativo en el agar nutritivo. Los procedimientos del manual de laboratorio de McDonald se utilizaron para realizar las pruebas necesarias para encontrar las dos bacterias desconocidas (3).

Primero, la mezcla de bacterias dentro del tubo Unknown 109 se extendió a través de una placa de agar nutritivo usando la técnica de cuadrante. La línea del cuadrante ayudó a esparcir las bacterias y facilitó que las dos bacterias diferentes formaran colonias que pudieran diferenciarse a simple vista. Este agar nutritivo se incubó a 37 ° C durante dos días. Se verificaron los resultados para ver si estaban creciendo dos bacterias separadas. Parecía demasiado crecido, por lo que la misma prueba de agar nutritivo se llevó a cabo varias veces. Los resultados mostraron que el agar nutritivo solo permitía que creciera una bacteria. Se tomó una tinción de Gram de una muestra de las bacterias que crecían en el agar nutritivo. La tinción de Gram resultó ser una tinción de Gram positiva en bacilos.

Todos los procedimientos siguientes se llevaron a cabo en el bacilo gram positivo desconocido en este orden:

Se realizó una prueba de MSA y EMB utilizando el Unknown 109 para tratar de promover el crecimiento de los gram negativos desconocidos, pero no funcionó. El profesor dio un tubo alternativo # 4, para que se pudiera encontrar el gram negativo desconocido. Se usó una técnica de cuadrante en una placa de agar nutritivo usando la Alternativa # 4. Se incubó durante 2 días a 37ºC. Se tomó una muestra de las bacterias que crecían en el agar nutritivo y se utilizó para la prueba de tinción de Gram. La alternativa n. ° 4 fue una varilla gramnegativa.

Todos los procedimientos siguientes se llevaron a cabo en la varilla gram negativa desconocida en este orden:

La Tabla I y el Diagrama de flujo I enumeran todas las pruebas, propósitos y resultados, y solicito las pruebas donde se realizaron para las bacterias Gram positivas utilizando el tubo Unknown 109. La Tabla II y el Diagrama de flujo II enumeran todas las pruebas, propósitos, resultados y orden de las pruebas donde se realizaron para las bacterias Gram negativas usando el tubo Alternativo # 4.

Tabla I: Pruebas de varillas grampositivas de un tubo 109 desconocido

Tabla II: Pruebas con varillas Gram negativas del tubo alternativo n. ° 4

Tinción de Gram (barra positiva)

Barra grampositiva Cocos grampositivos

Bacillus cereus Staphylococcus aureus

Bacillus subtilis Staphylcoccus epidermidis

Enterococcus faecalis

Leche Agar (positivo) Prueba de glicerol (positiva) Prueba de maltosa (positiva) Prueba de oxidasa (positiva)

Tinción de Gram (barra negativa)

Prueba MacConkey y EMB (ambas positivas)

Escherichia coli Proteus vulgaris

Neumonía por Klebsiella Pseudomonas aeruginosa

Enterobacter aerogenes

Escherichia coli Enterobacter aerogenes

Urea y citrato de Simmons (ambos negativos)

Neumonía por Klebsiella Escherichia coli

La identificación correcta de la bacteria gram positiva fue Bacillus cereus . los B. cereus se encontró usando la solución en el tubo de ensayo Unknown 109. Originalmente, se suponía que una muestra del tubo Desconocido debía inocularse en una placa de agar nutritivo utilizando la técnica de rayas cuadrantes. Esto fue para permitir que los grampositivos y gramnegativos se esparcieran, creando colonias separadas. Esto nunca ocurrió. Varias placas de agar nutritivo donde se inocularon y dos bacterias diferentes nunca crecieron. Luego, se concluyó que solo una bacteria estaba creciendo en el agar nutritivo, por lo que se realizó una tinción de Gram. El resultado fue un bacilo gram positivo, que descartó los cocos gram positivos. La prueba de rojo de metilo dio positivo por la presencia de fermentadores de glucosa. La prueba de caseína resultó negativa para la bacteria que tiene caseasa para hidrolizar la caseína. Este fue un hallazgo incorrecto porque B. cereus tiene casease. El hallazgo podría haber sido incorrecto porque el aclaramiento alrededor de la bacteria podría no haber sido tan claro para que el evaluador lo notara. La prueba de glicerol y maltosa mostró fermentación de carbohidratos al cambiar la solución de amarillo a rojo. La prueba de maltosa dio positivo, pero la prueba de glicerol arrojó resultados incorrectos por negativo. Las dos pruebas requieren que la bacteria esté en forma líquida cuando se agrega a los tubos de ensayo, pero la prueba se realizó porque la bacteria estaba en una gelatina de agar. Es posible que la bacteria no se haya mezclado bien con la solución de glicerol, creando una respuesta incorrecta. Por último, una prueba de oxidasa dio positivo para la bacteria que tiene el citocromo c. Esto completó la búsqueda del bacilo Gram positivo: B. cereus (3).

Dado que el tubo de ensayo desconocido original no permitía que creciera el gramnegativo, también se asignó un tubo alternativo n. ° 4. Ese tubo de ensayo solo tenía una bacteria gramnegativa. El tubo de la Alternativa n. ° 4 se usó para inocular una placa de agar nutritivo usando la técnica de rayas en cuadrantes. La bacteria gram negativa creció en el agar y se realizó una tinción de Gram. La tinción de Gram mostró que había presente una varilla gramnegativa. A continuación, se realizaron las pruebas MacConkey y EMB para detectar si la bacteria era entérica y fermentadora de lactosa. Fueron positivos y ácidos. La prueba de EMB produjo colonias metálicas verdes, que era una gran señal de que la bacteria podría estar Escherichia coli. La prueba de rojo de metilo fue positiva para la presencia de fermentación de glucosa. El citrato de Simmons mostró que la bacteria no puede usar únicamente citrato como fuente de carbono. La última prueba realizada fue la prueba de urea. Los resultados negativos explican que la bacteria no tenía la enzima ureasa, que descompone la urea. La bacteria no produjo un pH alcalino, sino ácido. Todos los resultados de la prueba salieron correctos, coincidiendo con todas las características de E. coli (3).

Theodor Escherich, bacteriólogo y pediatra alemán, descubrió por primera vez E. coli en 1919. La bacteria recibió su nombre desde que aisló y encontró sus componentes (2). E. coli es una bacteria gramnegativa con forma de bastoncillo. Se encuentra más comúnmente en los intestinos de los mamíferos. E. coli prefiere la temperatura más cálida del cuerpo y prospera descomponiendo los alimentos en los intestinos (4). los E. coli cepa O157: H7 es la única cepa conocida de los cientos descubiertos que puede hacer que los humanos se enfermen. La cepa O157: H7 libera una toxina en las cavidades corporales que inicia una enfermedad en los mamíferos (2). El Centro para el Control y la Prevención de Enfermedades enumera algunas precauciones para ayudar a detener la propagación de E. coli (1). Lo primero es lavarse las manos. Lávese siempre las manos después de ir al baño, antes de trabajar con alimentos y después de entrar en contacto con animales. Trate de evitar los productos lácteos no pasteurizados. Lave siempre las verduras y frutas antes de comerlas o prepararlas. Cuando cocine carne, use un termómetro para asegurarse de que se haya alcanzado la temperatura recomendada para asegurarse de que ya no existan bacterias en los alimentos (1). Asesinato E. coli es simple porque nunca se convierte en una espora. Se matan fácilmente hirviendo el agua en la que pueden estar viviendo o usando un proceso de esterilización básico (4).

& # 8220E. Coli (Escherichia Coli). & # 8221 CDC. Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades, 29 de marzo de 2013.

& # 8220 Escherichia Coli: ¿Una bacteria peligrosa o un modelo de prueba? & # 8221 Serendip Studio. Web. 26 abr.

McDonald, Virginia. Thoele, María. Salsiver, Bill. Gero, Susie. Manual de laboratorio para general

Mircobiología. BIO 203. St. Louis Community College en Meramec, abril de 2011.

Tortora, Gerard J. Funke, Berdell R. Case, Christine L. Microbiología: Introducción.


Ejemplo de un artículo de laboratorio desconocido de microbiología | Laboratorio de bacterias desconocidas

El estudio de la microbiología requiere no solo una comprensión académica del mundo microscópico, sino también una comprensión práctica de las técnicas y procedimientos de laboratorio utilizados para identificar, controlar y manipular microorganismos. La identificación adecuada de un microorganismo no solo es importante en un laboratorio de microbiología, sino también en los campos médico, industrial y farmacéutico. En este informe de laboratorio, se realizaron las técnicas y procedimientos de laboratorio aprendidos durante este curso para evaluar el conocimiento práctico de cada estudiante en microbiología.

El objetivo de este informe de laboratorio es 1) demostrar comprensión de los métodos y técnicas de laboratorio aprendidas durante el semestre 2) explicar las pruebas realizadas en cada incógnita aislada que llevaron a la identificación de cada incógnita 3) y dar un trasfondo de la características, patogenicidad y algunos usos de una de las incógnitas identificadas.


Materiales y métodos

Al comienzo de este proyecto, el profesor entregó a cada alumno un tubo de ensayo numerado que contenía dos bacterias desconocidas (una Gram positiva y una Gram negativa). El tubo de ensayo utilizado en este estudio fue el tubo 109. El instructor pidió que cada estudiante aislara las dos bacterias desconocidas y luego identificara cada una. Las técnicas y procedimientos de laboratorio utilizados a lo largo de este experimento fueron del manual de laboratorio de McDonald's (4).

Para empezar, las dos bacterias desconocidas debían aislarse con éxito. Usando un bucle de alambre, una pequeña muestra del tubo de ensayo numerado se colocó en un agar nutritivo usando el método de cuadrante de rayas (4). A continuación, se colocó el tubo de ensayo numerado en un frigorífico para ralentizar el crecimiento continuo. El agar nutritivo se etiquetó como "Aislamiento 1" y se colocó en una incubadora durante 48 horas a 37 grados Celsius. Después de 48 horas, se observó la placa de Aislamiento 1. Había 34 colonias aisladas presentes, todas las cuales mostraban el mismo patrón de crecimiento. Se eligieron cuatro al azar y se realizaron tinciones de Gram en cada uno (el procedimiento para la tinción de Gram se utilizó de acuerdo con el manual de laboratorio de McDonald's). Cada una de las cuatro tinciones de Gram mostró bacilos positivos. Al ver que no se observaron tinciones de Gram negativas, se adoptó un enfoque diferente. En su lugar, se trazó una pequeña muestra del tubo de ensayo numerado utilizando el método de aislamiento de cuadrante en una placa EMB (eosina-azul de metileno) y luego en una placa MSA (agar con sal de manitol) (4). La placa EMB inhibe las bacterias Gram positivas y la placa MSA inhibe las bacterias Gram negativas (4). Entonces, el crecimiento en cada plato debería favorecer solo una de las incógnitas. La placa EMB estaba etiquetada como "EMB 1" y la placa MSA estaba etiquetada como "MSA 1". Cada uno se colocó en la incubadora durante 48 horas a 37 grados Celsius. Después de 48 horas, se observó cada placa. El EMB 1 tuvo muy poco crecimiento, por lo que se devolvió a la incubadora y se dejó crecer durante otras 48 horas. MSA 1 tuvo un crecimiento excesivo significativo y fue descartado. Se creó una nueva placa de MSA, etiquetada como MSA 2, utilizando el mismo método de racha de aislamiento de cuadrante. Solo se dejó incubar durante 24 horas a 37 grados Celsius en lugar de 48 horas. Después de 24 horas, se observó MSA 2. Tenía muchas colonias bien aisladas. Una de las colonias se transfirió a otra placa MSA, etiquetada como MSA 3, utilizando la línea de aislamiento del cuadrante. (Esto se realizó para asegurar que las bacterias Gram positivas estuvieran bien aisladas de las Gram negativas). Se colocó MSA 3 en la incubadora a 37 grados Celsius durante 24 horas. Después de otras 24 horas, se observaron tanto MSA 3 como EMB 1. Tanto EMB 1 como MSA 3 tenían colonias bien aisladas. Una de las colonias de la placa MSA 3 se tiñó con Gram. Mostró bacilos Gram positivos. Se transfirió un bucle lleno de bacterias de esa misma colonia de MSA 3 a una placa de agar nutritivo etiquetada como "stock positivo para NA". Esta placa de agar nutritivo se convirtió en la placa de reserva para bacterias Gram positivas durante el resto del experimento. Una de las colonias bien aisladas en la placa EMB 1 se transfirió a una nueva placa EMB, etiquetada como EMB 2, utilizando el método de racha de aislamiento de cuadrante. (Esto fue para asegurar que las bacterias Gram negativas estuvieran bien aisladas de las Gram positivas en la placa). Tanto la placa EMB 2 como la placa madre NA positiva se colocaron en la incubadora a 37 grados Celsius. Después de 72 horas, una de las colonias bien aisladas en EMB 2 se tiñó con Gram. Se observaron bacilos gramnegativos. Se transfirió un bucle lleno de bacterias de esa misma colonia a una nueva placa de agar nutritivo y se etiquetó como "stock NA negativo". Se colocó en la incubadora a 37 grados centígrados. En este punto, ambas bacterias se aislaron con éxito y se colocaron en placas de agar nutritivo de reserva.

Se realizaron varias pruebas en cada uno de los cultivos bacterianos desconocidos. Una explicación de cada prueba y los resultados se encuentran en la Tabla 1 (para las bacterias Gram positivas) y la Tabla 2 (para las bacterias Gram negativas). Las pruebas se realizaron de tal manera que cada prueba eliminaba un posible candidato desconocido. El Cuadro 1 detalla la secuencia de pruebas realizadas en las bacterias Gram positivas y el Cuadro 2 detalla la secuencia de las pruebas realizadas en las bacterias Gram negativas.

Para las bacterias gram positivas, se realizaron las siguientes pruebas:

Para las bacterias gram negativas, se realizaron las siguientes pruebas:

*Todas las pruebas se realizaron y explicaron como se describe en el Manual de laboratorio McDonald

Tabla 1. Resultados de grampositivos desconocidos

PRUEBA REACTIVOS o MEDIOS OBSERVACIONES RESULTADOS Interpretaciones
Tinción de Gram Violeta cristal, yodo de Gram, alcohol, safranina Varillas moradas Bacilos Gram positivos
Urea Tubo de urea Ningún cambio de color permaneció amarillo Negativo Las bacterias Gram positivas no pueden producir ureasa, que hidroliza la urea en dióxido de carbono y amoníaco.
Catalasa Peróxido de hidrógeno Burbujeante Positivo Las bacterias Gram positivas poseen la enzima catalasa, que descompone el peróxido de hidrógeno en gas oxígeno y agua.
Caseína Agar de leche Sin limpieza alrededor de las bacterias Negativo Las bacterias Gram positivas no pueden producir caseasa, que degrada la proteína caseína en la leche.
Rojo de metilo Tubos MR-VP, colorante rojo de metilo Después de agregar rojo de metilo al tubo de ensayo, el color cambió de amarillo claro a amarillo más oscuro sin rojo presente Negativo Las bacterias Gram positivas no producen ácido durante el catabolismo de la glucosa.
Glicerol Tubo de glicerol Después de la inoculación y la incubación, el tubo permaneció rojo. Negativo Las bacterias Gram positivas no fermentan el glicerol.
Citrato Agar citrato de Simmons El agar cambió de color de verde a azul Positivo Las bacterias Gram positivas producen la enzima citrasa, que descompone el citrato.

Tabla 2. Resultados para Gram Negativo Desconocido

PRUEBA REACTIVOS o MEDIOS OBSERVACIONES RESULTADOS Interpretaciones
Tinción de Gram Violeta cristal, yodo de Gram, alcohol, safranina Varillas rosadas Bacilos gramnegativos
Nitrato Tubos de caldo de nitrato, reactivo de nitrato A, reactivo de nitrato B, zinc en polvo Después de la adición de los reactivos A y B, el color fue rojo intenso. Positivo Las bacterias gramnegativas pueden reducir el nitrato a nitrito
Citrato Agar citrato de Simmons El agar cambió de color de verde a azul Positivo Las bacterias Gram negativas producen la enzima citrasa, que descompone el citrato.
Urea Tubo de urea Ningún cambio de color permaneció amarillo Negativo Las bacterias Gram negativas no pueden producir ureasa, que hidroliza la urea en dióxido de carbono y amoníaco.
Caseína Agar de leche Limpiar la racha bacteriana Positivo La bacteria Gram negativa es capaz de producir caseasa.
Voges-Proskauer (vicepresidente) Tubos MR-VP, reactivo VP A, reactivo VP B Después de la adición de los reactivos A y B, el tubo se volvió amarillo. Negativo Las bacterias Gram negativas no producen acetoína como producto final de la fermentación de glucosa.
Sorbitol Tubo de sorbitol Cambio de color de rojo a amarillo Positivo Las bacterias Gram negativas fermentan el sorbitol.


Discusión / Conclusión

Se identificó que el grampositivo desconocido era Bacillus subtilis. El instructor verificó que esto fuera correcto. Esta deducción se alcanzó con varias pruebas. En primer lugar, la incógnita grampositiva fue la forma de la varilla. Esto lo redujo a ambos Bacilo especies. Sin embargo, el investigador consideró que era importante realizar una batería de pruebas para concluir con seguridad que el Gram positivo desconocido era de hecho B. subtilis. Por lo tanto, la secuencia preconstruida de pruebas aún se realizó como si las cinco opciones de Gram positivas aún fueran posibles. En segundo lugar, la serie de pruebas realizadas en Gram positivos desconocidos condujo a B. subtilis como el único candidato posible. Una prueba de urea negativa eliminada S. epidermidis como posibilidad. Se eliminó una prueba de catalasa positiva E. faecalis como posibilidad. Una prueba de caseína negativa eliminada S. aureus como posibilidad. Y, una prueba de rojo de metilo negativa eliminada B. cereus como posibilidad. Esto solo queda B. subtilis. La prueba de citrato y la prueba de glicerol se realizaron para asegurar la precisión de la identificación de B. subtilis como el Gram positivo desconocido. La prueba de citrato fue positiva y la prueba de glicerol fue negativa. Ambas pruebas coincidieron con los resultados esperados de B. subtilis metabolismo.

Se identificó que el Gram negativo desconocido era Pseudomonas aeruginosa. El instructor verificó que esto fuera correcto. Esta deducción se alcanzó por un par de razones. En primer lugar, cada una de las pruebas de la serie descartó un posible candidato hasta P. aeruginosa era la única posibilidad que quedaba. Se descartó una prueba de nitrato negativa E. coli. Se descartó una prueba de citrato positiva P. vulgaris (y reforzó la decisión de que E. coli no era lo desconocido). Una prueba de urea negativa eliminada K. pneumoniae (y reforzó la decisión de que P. vulgaris no era lo desconocido). Se descartó una prueba de caseína negativa E. aerogenes como posibilidad. Esto solo queda P. aeruginosa como lo desconocido. Se realizó una prueba de VP y una prueba de sorbitol para validar que P. aeruginosa era lo desconocido. Una prueba de VP negativa y una prueba de sorbitol positiva coincidieron con los resultados esperados de P. aeruginosa metabolismo.

No ocurrieron problemas difíciles con la identificación de B. subtilis. El único pequeño problema fue que B. subtilis creció extremadamente rápido y el crecimiento excesivo era un problema común. Por ejemplo, una placa de reserva de agar nutritivo para B. subtilis fue inoculado casi a diario para asegurar que los cultivos utilizados para cada una de las pruebas de identificación fueran jóvenes.

Sin embargo, el Gram negativo desconocido fue muy difícil de identificar. En primer lugar, todas las posibilidades desconocidas Gram negativas eran bacilos. Esto hizo que la tinción de Gram fuera inútil para identificar P. aeruginosa basado en la forma. En segundo lugar, el cultivo fue muy difícil de aislar porque creció extremadamente lentamente en las placas EMB y un cultivo puro tomó dos semanas para lograrlo. En tercer lugar, varias de las pruebas tuvieron que repetirse porque la primera placa de stock de P. aeruginosa se encontró que estaba contaminado. Todas las pruebas tuvieron que ser desechadas y repetidas usando una placa madre recién cultivada de P. aeruginosa. Después de una segunda ronda de pruebas, todos los resultados coincidieron con los resultados esperados de P. aeruginosa excepto por la prueba VP. Resultó positivo. Se realizó por tercera vez y el resultado fue negativo. La segunda prueba de VP probablemente estaba contaminada y no fue un resultado de prueba confiable.

Información de antecedentes sobre Bacillus subtilis

Bacillus subtilis es un microbio muy estudiado. Se considera la especie “tipo” del género Bacillus (2). B. subtilis, de la familia Bacillaceae, fue nombrado en 1872 por Ferdinand Cohn (3). Esta bacteria también se conoce con los nombres de bacilo del heno o bacilo de la hierba (1). Como otras bacterias en el Bacillaceae familia, B. subtilis puede crecer en presencia de oxígeno (con la ayuda de su enzima catalasa) y forma endosporas (1). Se predice que pasa la mayor parte del tiempo inactivo y en forma de esporas. B. subtilis se recupera comúnmente del suelo, el agua, el aire y el material vegetal en descomposición (1). Se pueden usar diferentes cepas de B. subtilis como agentes de control biológico en diferentes situaciones. Una de las cepas de B. subtilis produce una sustancia química llamada iturina (1). Esta sustancia química actúa como inhibidor del crecimiento de muchas otras bacterias y algunos hongos, lo que permite que B. subtilis compita con otros microorganismos que viven en el suelo (1). Debido al efecto inhibidor de esta cepa sobre muchas otras bacterias, a veces se agrega al fertilizante para ayudar a que las plantas delicadas crezcan (1). Además, algunas empresas de probióticos están utilizando B. subtilis en sus probióticos debido a su efecto inhibidor sobre muchas bacterias entéricas patógenas (2). Sin embargo, algunas investigaciones cuestionan si es prudente colocar una bacteria productora de endosporas en el intestino de un ser humano, incluso si actualmente no es patógena para los humanos. Contrariamente a esto, los estudios han encontrado que B. subtilis a veces habita naturalmente en el tracto intestinal de los humanos sin causar ningún daño (2). En su forma actual, se cree que B. subtilis no es patógena para los seres humanos. Algunas otras aplicaciones comerciales de B. subtilis incluyen: agentes de limpieza en detergentes, procesamiento de cuero, preparación de platos especiales japoneses y coreanos, modificación del almidón y varios otros productos químicos especializados (3).


Bacterias Gram positivas desconocidas para microbiología

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James Arnold
Microbiología
2 de diciembre de 1999

La incógnita grampositiva que me asignaron estaba en solución con una incógnita gramnegativa que también tenía que ser identificada. Para identificarlas, se tuvo que realizar la técnica de raya para aislamiento en la que las dos bacterias se rayaban en agar nutriente y luego se diferenciaban por su apariencia. Las dos incógnitas que tenía no eran fácilmente distinguibles y resultó en un problema considerable para aislarlas. En un momento, solo crecí alrededor de 2 millones de células de mi Gram negativo desconocido en una placa y alrededor de 200 células de Gram positivo. A partir de estas estadísticas, supe que sería imposible aislar las bacterias individuales. Descubrí estas estadísticas realizando una tinción de Gram en el cultivo mixto para ver si tenía dos bacterias creciendo. Tenía dos bacterias creciendo, pero la gram negativa estaba creciendo más rápido que la grampositiva. Después de muchos intentos, el Dr. Darden me dio las bacterias grampositivas y tuve que continuar con el proyecto. Cultivar cultivos puros de gramnegativos fue muy fácil porque había muchos de ellos. Las posibilidades de elegir una célula grampositiva con todas las demás células gramnegativas eran muy pequeñas, por lo que se realizó una racha separada con las bacterias gramnegativas para su identificación.

Las bacterias grampositivas se tiñeron con Gram utilizando el método descrito en el manual de laboratorio en la página 61. El procedimiento siguió los pasos:

1. Las bacterias se untan en un portaobjetos y se dejan secar.
2. Las bacterias se fijan con calor al portaobjetos.
3. Se agrega pigmento violeta cristal al frotis durante 1 minuto.
4. Lave el pigmento con agua destilada.
5. Aplique gramos de yodo durante 1 minuto.
6. Lavar el yodo con agua destilada.
7. Decolorar el frotis con alcohol etílico al 95% gota a gota hasta que salga transparente.
8. Lavar el alcohol con agua destilada.
9. Contratinción con Safranin durante 45 segundos
10. Lavar la safranina con agua destilada.
11. Seque con papel Bibulous.

Siguiendo este procedimiento, descubrí que mis células bacterianas tenían forma de varilla y estaban encadenadas. Su apariencia de color azul oscuro en el portaobjetos hizo que la determinación de la forma y el gramaje de las bacterias fuera bastante fácil. Siguiendo el diagrama de flujo que se nos dio, descubrí que la siguiente prueba que tenía que realizar era una prueba para los formadores de esporas. La prueba utilizada fue la tinción de esporas, también conocida como Método Schaeffer-Fulton. Esta prueba se describe en la página 71 del manual de laboratorio y consiste en usar el tinte primario verde de malaquita para teñir las células. Las células se inundan con la tinción primaria durante tres minutos mientras están en una placa caliente. El calor se utiliza para ayudar a que la mancha primaria penetre en las capas impermeables de la espora. Después de esta tinción, tanto las células vegetativas como las de esporas son verdes. El siguiente paso es el agente decolorante, que es agua destilada. Después de calentar las células durante tres minutos, se dejan enfriar y luego se decoloran con agua destilada. Toda la mancha primaria se elimina de las células vegetativas, pero la espora retendrá la mancha. El último paso es contratinir las células con safranina. La safranina coloreará las células vegetativas previamente decoloradas de rojo para que ahora contrasten las células de esporas verdes. Después de lavar la safranina de las células, se examinan bajo el microscopio bajo inmersión en aceite en busca de esporas. Mi desconocido no tenía esporas y eso me llevó a la siguiente prueba para determinar si las bacterias eran resistentes al ácido o no. En este punto, supe que la bacteria tenía que ser Mycobacterium o Lactobacillus en la naturaleza de acuerdo con el diagrama de flujo. Mi conjetura en este punto era Lactobacillus porque tengo la sensación de que la prueba ácido-resistente sería negativa.

La prueba acidorresistente como se indica en la página 65 del manual de laboratorio es una prueba diseñada para agrupar las bacterias en dos grupos, acidorresistentes y no acidorresistentes. Hay algunas bacterias, como Mycobacterium, que tienen una cápsula cerosa gruesa y no se pueden teñir con otros métodos de tinción, mientras que otras se pueden teñir con tinciones simples y la tinción de Gram. Este fue el factor determinante de la bacteria desconocida. ¿Era miembro del género Mycobacterium? La tinción acidorresistente, también llamada Método Ziehl-Neelsen, utiliza tres reactivos. Carbol Fuchsin es la tinción principal. El ácido-alcohol (3% HCl + 95% etanol) es el agente decolorante. La contratinción es azul de metileno. Para esta prueba, utilicé un cultivo de bacterias de 24 horas en comparación con un cultivo de 72 horas para la tinción de esporas. La prueba consiste en aplicar Carbol Fuchsin al frotis bacteriano durante 5 minutos sobre calor para ayudar en la penetración de la mancha. Después de 5 minutos, las células se decoloran con agua destilada. El ácido-alcohol se agrega gota a gota hasta que se aclare y luego se lava con agua destilada.

Finalmente, se agrega la contratinción de azul de metileno durante dos minutos y luego se lava con agua destilada. Luego, el portaobjetos se seca con papel absorbente y luego se observa bajo inmersión en aceite para determinar si las bacterias son resistentes a los ácidos. Las células no resistentes a los ácidos sufrirán una decoloración cuando se les pase el alcohol ácido y se volverán azules cuando se les agregue la contratinción. Las células acidorresistentes retendrán la mancha primaria y permanecerán rojas incluso después de la decoloración y contratinción. Se descubrió que la bacteria desconocida no era resistente a los ácidos porque permanecía azul después de la contratinción. Esto significa que la bacteria debe ser miembro del género Lactobacillus. Después de buscar en el Manual de Bergey, encontré que mis bacterias desconocidas eran Lactobacillus casei.

El género Lactobacillus es muy útil para los humanos. Es muy importante en la producción de vegetales fermentados como encurtidos y también se utiliza en la producción de productos como cerveza, vino y panes de masa madre. Tiene una relación comensal con humanos y animales en el tracto digestivo. Fuera del cuerpo humano, este género se encuentra en los alimentos para animales, el estiércol y la leche porque dependen de la lactosa como forma de subsistencia.


¡Se ha encontrado vida extraterrestre! Lamentablemente, algunas de las criaturas se han infectado con una bacteria de la Tierra. En esta simulación, aprenderá a identificar bacterias desconocidas. Al igual que en los entornos clínicos de la Tierra, es importante identificar patógenos desconocidos para el diagnóstico y el tratamiento. Explore técnicas de microbiología clínica, como tinción diferencial, medios diferenciales y selectivos y ensayos bioquímicos, luego utilice sus nuevas habilidades para identificar las bacterias.

Explore las técnicas de microbiología clínica

Explore el laboratorio y conozca las diferentes técnicas de microbiología clínica y cómo funcionan jugando un minijuego. Tendrá que averiguar cómo utilizar todas las herramientas y reactivos y adivinar qué resultados puede esperar de cada ensayo. Dependiendo de su nivel de conocimiento, puede dedicar más o menos tiempo a explorar el laboratorio y participar en las conversaciones explicativas.

Combinar pruebas de forma crítica para identificar bacterias desconocidas

Interprete una tinción de Gram, luego cultive su muestra usando medios diferenciales y realice las pruebas bioquímicas de catalasa, oxidasa e indol en ella. Combine críticamente los resultados de estos ensayos para identificar la bacteria desconocida. Debido a que diferentes bacterias pueden causar síntomas similares, el asistente de laboratorio Dr. One ha tomado una muestra de otro Kuppelfang infectado. Ayude interpretando los resultados del Dr. One o vuelva a hacer la simulación y elija otro Kuppelfang para tomar una muestra si desea practicar más con alguna de las técnicas.

Administrar tratamiento y verificar sus resultados

Comunique sus resultados y vea si sus pacientes de Kuppelfang mejoran después del tratamiento. Mientras tanto, su colega en la Tierra ha analizado su muestra con un ensayo de hibridación de ácido nucleico. ¿Sus resultados coinciden con los tuyos?


Ejercicios de laboratorio en microbiología, 5a edición

Microtubos 12 y ndash20: utilización de carbohidratos glucosa, manitol, inositol, sorbitol, ramnosa, sacarosa (sacarosa), melibiosa, amigdalina y arabinosa (Glu, Man, Ino, Sor, Rha, Sac, Mel, Amy y Ara), 203

Inoculación de medios de identificación rápida, 204

Prueba de inoculación de EnteroPluri, 204

Inoculación del sistema Api 20 E, 204

21 Identificación de una bacteria desconocida: la gramnegativa desconocida 209

Identificación por computadora, 210

Hoja de trabajo de valor de identificación para la prueba EnteroPluri II 212

22 Identificación de una bacteria desconocida: los cocos grampositivos 217

PARTE 6 Microbiología alimentaria y ambiental

23 Identificación y cuantificación de números microbianos en una muestra de agua 225

Prueba presuntiva: análisis de una muestra de agua contaminada para detectar la presencia de coliformes, 226

Cuantificación del número microbiano en una muestra de agua, 227

24 Identificación de microbios en carne de res y aves de corral y cuantificación de números microbianos 231

Presencia microbiana en un producto alimenticio y recuentos de colonias, 232

Reconocimiento de organismos géneros, 233

25 Microbiología del suelo 237

Parte 1: Recuperación de microorganismos del suelo, 238

Aislamiento de bacterias del suelo, 239

Parte 2: Aislamiento de bacteriófagos del suelo de Bacillus subtilis, 239

26 Ecología microbiana 245

Competencia entre bacterias, 246

Producción de bacteriocina, 246

Interacción bacteriana y fúngica (lámina 65), 247

Crecimiento de placa dental in situ, 252

Crecimiento de biopelículas bacterianas in vitro, 253

Clave de respuestas para las pruebas previas al ejercicio 263

Apéndice 1 Diagramas de flujo y diagramas de comparación para la identificación de bacilos gramnegativos entéricos mediante procedimientos de prueba tradicionales 265

Apéndice 2 Diagrama de flujo para la identificación de enterobacterias basado en el sistema de identificación rápida API 20 E 269


Informe de laboratorio desconocido de microbiología | Bacillus cereus

Existen múltiples razones por las que es útil saber identificar diferentes microorganismos. “Los microorganismos son esenciales para nuestra propia existencia. Son ubicuos, se encuentran en entornos comunes como el suelo, el agua y el aire ”(4). Conocer la diferencia entre diferentes microorganismos no solo puede ayudar a identificar una enfermedad, sino también qué está causando una enfermedad en un paciente y qué antibiótico puede ayudar a tratar esa enfermedad. Los microorganismos también se encuentran en todos los alimentos, y conocer los diferentes microorganismos puede ayudar a identificar cuándo los alimentos han pasado su mejor momento. Para identificar una bacteria desconocida, el estudio se realizó aplicando todos los métodos que se han utilizado hasta ahora durante la clase de laboratorio de microbiología.


MATERIALES Y MÉTODOS

El profesor le dio al estudiante un tubo de ensayo desconocido etiquetado con el número 105. El tubo de ensayo contenía un cultivo mixto de dos bacterias desconocidas, una gram positiva y otra gram negativa. Los métodos que se han utilizado a lo largo del semestre para identificar bacterias específicas se aplicaron a lo desconocido. Los métodos y procedimientos se siguieron como se indica en el manual de laboratorio de microbiología, a menos que se indique lo contrario.

El primer día, el primer objetivo fue completar una línea de aislamiento del cultivo mixto en agar nutritivo. El objetivo de esta prueba era aislar correctamente las dos bacterias diferentes. The nutrient agar was incubated at 37 degrees Celsius for 48 hours. Upon observation on day two the nutrient agar plate appeared to be tinted a light green color, which is comparable to the pigment of the agar completed in exercise #10 on the lab manual, which led to the belief that the gram negative bacteria was Pseudomonas aeruginosa. To confirm these beliefs, a new isolation streak of organism A’s pure colony was created.

On day three a gram stain of the pure colony was completed following the steps for gram stain on page 67 of the lab manual. Going forward the gram negative bacteria was labeled Bacteria A and the gram positive bacteria was labeled Bacteria B and this is how each bacterium will continue to be referred to. The gram stain revealed a gram negative organism with a rod shape. These results did not narrow down the options since all of the gram negative organisms were rod shaped. A gelatin agar test was completed to test bacteria A’s ability to hydrolyze gelatin through the action of the extracellular enzyme gelatinase. Gelatin in this medium is used to solidify the agar. If the medium liquefies, the result is positive. The result of the gelatin agar test for bacteria A came back negative which ruled out Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes, y Proteus vulgaris. This left Pseudomonas aeruginosa as the gram negative bacteria.

On day four a Kligler Iron agar test was completed to test for fermentation of glucose. The Kligler Iron agar test resulted in a negative reaction for fermenting glucose which backed up the gelatin agar test results, meaning organism A was Pseudomonas aeruginosa (1).Please refer to the information shown in table 1 and flowchart A.

All of the following tests were performed for Bacteria A:

Bacterium B was unable to be isolated during the original isolation streak completed on day one. Two more isolation streaks were completed, both with the same results. A Mannitol Salt Agar (MSA) test was completed on day two using the original mixed culture 105 in efforts to isolate only bacterium B. The student tried this test because MSA is a selective agar for gram positive bacteria. On day three the results of the MSA plate were checked and no bacteria was noted. This most likely occurred due to a bad streak of bacteria or a contaminated original culture. The professor gave the student a brand new pure colony of gram positive bacteria. This will still be noted as Bacteria B going forward.

A gram stain was completed and the results were a gram positive rod, which ruled out Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, y Enterococcus faecalis, and leaving Bacillus cereus, y Bacillus subtilis as possibilities. A nitrate test was done next to confirm results of the gram stain. The Nitrate test determines if the bacteria can anaerobically reduce nitrate. The nitrate test confirmed the gram stain, leaving the choices for bacteria B to be Bacillus cereus, o Bacillus subtilis. A gelatin test was completed and the results were positive, which backed up the results of the gram stain and the nitrate test. A Methyl Red test was then completed to test for the production of a mixture of acids due to glucose fermentation. This test had a positive result which ruled out Bacillus subtilis, dejando Bacillus cereus to be bacteria B (1). Please refer to the information shown in table 2 and flowchart B.


Unknown Microbiology Lab Report

The purpose of this lab was to identify two unknown bacteria from a mixed culture. The reason for identification of unknown bacteria was to help students recognize different bacteria through different biochemical tests and characteristics. This is important in the medical field because identification of unknown bacteria can help treat a patient by knowing the contributing source of a disease. Also knowledge of different bacteria helped others make antibiotics used today. This lab was completed by using the methods learned thus far in identification of bacteria.

A mixed culture of two unknown bacteria was provided by the instructor. The methods used for identification of the two unknown bacteria were in the laboratory manual by Dr. Floyd and Dr. Kennedy (1) unless otherwise noted. The first step that was used was a three streak method, described in Lab 4, on a Blood Heart Infused/Trypticase Soy Agar plate to isolate the two unknown bacteria. Once the two bacteria were incubated, grown, and isolated they were each individually streaked on a Trypticase Soy Agar plate to isolate individual colonies to be studied, tested and identified. After incubation of the individual TSA plates, the morphologies were viewed and noted and a Gram stain was completed on each individual bacterium, which will be referred to as Bacteria #1 and Bacteria #2. After the Gram reaction was determined on Bacteria #1 and Bacteria #2, different biochemical tests were done according to the dichotomous keys provided in the lab manual. All the tests were performed by the methods outlined in the lab manual by Dr. Floyd and Dr. Kennedy (1). Table 1 and Table 2 list the tests performed, purpose, and results. Also Flow Chart 1 and Flow Chart 2 will show the results.

The Unknown Bacteria 36/ Bacteria #1 on a TSA plate was examined by the naked eye and under a dissecting microscope. Bacteria # 1 was.


References Section

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Identification of Bacteria: 7 Steps

The following points highlight the seven steps for identification of bacteria isolated from a specimen. The steps are: 1. Morphology and Staining 2. Cultural Characteristics 3. Biochemical Reactions 4. Antigenic Characters 5. Typing of Bacteria: Bacteriophage Sensitivity 6. Animal Pathogen City 7. Antibiotic Sensitivity.

Identification of Bacteria: Step # 1. Morphology and Staining:

Serve as preliminary criteria. The Gram stained smear shows the Gram reaction, size, shape, groupings of the bacteria and intracellular position of the endospore. Special staining reaction can reveal the presence of capsule.

Hanging drop wet preparation can be used to study the motility of bacteria. An unstained wet film is examined under dark ground illumination microscope to observe the exact morphology of delicate spirochaete. A smear is stained by Ziehl Neelsen method to demonstrate the acid fast staining reaction.

Identification of Bacteria: Step # 2. Cultural Characteristics:

The growth requirement and the appearance of colonies on media to the naked eye are further criteria to assist the identification of bacteria. A culture is a growth of bacterium on artificial nutrient medium or culture medium prepared in the laboratory.

Attempts are made to grow (to cultivate or culture) the bacteria on media of different compositions (glucose, inorganic salts mixture, meat extract or meat infusion with blood) incubated under a variety of conditions (different temperatures, pH) in the presence of atmospheric oxygen (aerobically).

The ability or inability to grow on medium containing a selective inhibitor (e.g. bile salt, optochin, tellurite, bacitracin, malachite green, low pH, high pH) may also be useful to identify the bacteria.

The growth of bacteria in liquid culture medium (e.g. nutrient broth) may show:

(2) Little deposit at the bottom

(3) Surface growth (pellicle formation). (Fig. 7.1a).

The appearance of the discrete masses of growth or colonies that can be grown from isolated bacteria on the surface of the solid medium (nutrient agar) can be used to study the size of the colonies (diameter in mm), their outline (whether circular, entire, indented or wavy or rhizoid), their elevation (low convex, high convex, flat, plateau-like, umbonate, or nodular)—Fig. 7.1b), their transparency (clear and transparent) or opaque, whether they are colourless (white or pigmented) or whether they produce any change in the medium (e.g. haemolysis in the blood agar medium).

Identification of Bacteria: Step # 3. Biochemical Reactions:

P.ej. fermentation of various sugars (carbohydrates). Morphology and cultural characters may not be able to distinguish some species of bacteria but these same species may exhibit distinct differences in their biochemical reactions e.g. typhoid and paratyphoid bacilli (glucose and mannitol are fermented without gas production by typhoid bacilli, whereas paratyphoid bacilli produce acid and gas).

Certain serotypes of the salmonella group may resemble one another in fermentation properties.

The growth of the bacteria in liquid medium will ferment particular sugars (glucose, lactose, mannitol) with the production of acid, which is detected by the changes of colour of Andrade’s indicator dye incorporated in the medium the gas production is detected by the collection of air bubble in a small inverted tube (Durham’s tube) immersed in the medium.

Other tests are used to find out the ability of a bacterium to produce particular end products e.g Indole, hydrogen sulphide, nitrite and certain enzymes (oxidase, catalase, urease, gelatinase, collagenase, lecithinase, lipase) in culture media.

Identification of Bacteria: Step # 4. Antigenic Characters:

Species or types of bacteria can be easily and distinctly identified by “específico” antibody reactions observed in serological tests performed on a glass slide. This specific antibody (antiserum) is obtained from the animal (rabbit) immunized against a particular type of microorganisms which agglutinates with the same antiserum.

An unknown bacterium may thus be identified by demonstrating its reaction with one out of a number of standard known antisera.

Similarly, the serum of a person suffering from a bacterial infection may contain specific antibody. The nature of the infection may thus be diagnosed by demonstrating that the patient’s serum agglutinates one out of a number of known antigens of laboratory cultures, e.g. Widal test in Typhoid fever.

Identification of Bacteria: Step # 5. Typing of Bacteria: Bacteriophage Sensitivity:

A single bacterial pathogenic species may include different types of strains which are distinguishable in minor characters. Recognition of the type of a strain isolated from a patient may be of great importance in epidemiological studies related to the source and the spread of the infection in the community.

The typing of stains may be done by special biochemical or serological tests. Another important method of typing is by testing the susceptibility of the culture to lysis by each of a set of type specific, lytic bacteriophages.

Identification of Bacteria: Step # 6. Animal Pathogen City:

Final identification of a toxigenic strain of tetanus bacillus may be done by injecting the toxin liberated by tetanus bacillus into the base of the tail of two mice, one of them has already been protected by prior injection of specific antiserum to tetanus toxin (a soluble poisonous protein secreted by the tetanus bacilli).

The unprotected mouse shows the symptoms of tetanus, whereas the protected one without any tetanus symptoms identifies the culture, as an organism producing toxin, as the injected antiserum neutralized toxin liberated by tetanus bacilli. Similarly, diphtheria bacillus is also identified by inflammation and necrosis of the skin of guinea pig brought by diphtheria exotoxin.

Identification of Bacteria: Step # 7. Antibiotic Sensitivity:

The organism is tested for its ability to grow on artificial nutrient media containing different antibiotics and chemotherapeutic agents in different concentrations. In disk diffusion test, the culture to be examined is inoculated confluently with swabs over the surface of an agar plate and six to ten paper disks containing different antibiotics are placed in different areas of the plate.

Antibiotic diffuses outwards from each disk into surrounding agar. On incubation, the bacteria grow on areas of the plate except those around the antibiotic disks to which they are sensitive. The width of each growth-free “zone of inhibition” is a measure of the degree of the sensitivity of the drug.

Information about the sensitivity patterns of strains (anti-bio-grams) isolated from the patient is required as a guide to the drug of choice for therapy and may also be used as an epidemiological marker in tracking hospital cross-infection.


Ver el vídeo: CELULA BACTERIANA (Enero 2022).